一、 胰蛋白酶消化液核心功能與原理
功能：消化細胞間的連接蛋白和細胞與培養皿表面連接的蛋白，從而使貼壁細胞“脫落”下來，形成單個細胞的懸液。
原理：胰蛋白酶（Trypsin） 是一種絲氨酸蛋白酶，它能特異性切割蛋白質中精氨酸（Arg）和賴氨酸（Lys） 的羧基端肽鍵。細胞膜表面和細胞外基質（ECM）中的許多蛋白（如纖維連接蛋白、層粘連蛋白等）都含有這些氨基酸序列。
胰酶通過切割這些蛋白，破壞細胞與細胞、細胞與培養表面的連接，實現細胞解離。
二、胰蛋白酶消化液關鍵成分
標準的胰蛋白酶消化液通常包含：
1. 胰蛋白酶（Trypsin）：核心消化成分。濃度通常是 0.05% 或 0.25%，濃度越高消化能力越強。
2. EDTA（乙2胺四乙酸）：一種金屬離子螯合劑。它能螯合細胞 adhesion 依賴的 Ca²⁺ 和 Mg²⁺，而這些二價離子是許多細胞粘附分子（如鈣粘蛋白）維持功能所必需的。胰酶和EDTA有協同作用：EDTA通過剝奪離子弱化細胞連接，使胰酶能更有效地切割蛋白，從而大大提高消化效率，減少所需胰酶濃度和消化時間。
3. 緩衝鹽溶液：通常是 PBS（磷酸鹽緩衝液） 或 無Ca²⁺/Mg²⁺的平衡鹽溶液。必須不含鈣鎂離子，否則會抑制EDTA的活性，降低消化效率。因此，您最常看到和使用的其實是 胰酶-EDTA 消化液（Trypsin-EDTA Solution），例如 “0.25% Trypsin-0.53mM EDTA” 溶液。
三、 胰蛋白酶消化液主要用途
1. 細胞傳代（Subculture/Passage）：這是最主要用途。當貼壁細胞長滿培養容器時，需要用胰酶消化將其消化下來，然後分到新的培養瓶中進行擴增。
2. 細胞 harvesting：在實驗結束時需要收集細胞進行分析（如流式細胞術、Western Blot、PCR等）。
3. 原代組織消化：在從動物組織中分離原代細胞時，常會使用膠原酶、胰酶等混合消化液來分解組織間的膠原和蛋白。
四、胰蛋白酶消化液使用流程簡介（以細胞傳代為例）
1. 棄舊液：吸除原來的細胞培養液。
2. 洗滌：加入預熱的PBS緩衝液輕輕洗滌細胞殘留的血清（血清中含有胰酶抑制劑），然後吸除。
3. 加胰酶：向培養瓶中加入適量胰蛋白酶消化液，輕輕搖動使其覆蓋所有細胞表面。
4. 孵育：將培養瓶放入37°C培養箱中孵育幾分鐘。時間需優化，通常鏡下觀察細胞變圓、間隙增大即可。
5. 終止：加入含血清的完全培養液（血清中的蛋白能有效抑制胰酶活性），反復吹打細胞層，使細胞完全脫落並分散成單細胞懸液。
6. 離心重懸：離心後棄去上清（含胰酶），用新鮮培養液重懸細胞，然後按比例分到新瓶中。
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